Diabetologia：激活但功能破损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到人体内自身免疫到注意到1改进型白血病诊疗病征的实质性率在儿童时期就有不太好的描述，多个人体内自身免疫非典型的儿童中的有70%在血清转换成后10年内患上白血病，而随访15年的儿童这一比率减低到84%。相比较来说之下，占诊疗1改进型白血病一半以上的改进型1改进型白血病的发作机制还未得到充分的研究工作。

越来越多的人开始适用分期系统来定义1改进型白血病的实质性：有机体在注意到多种人体内自身免疫时离开第1过渡期，注意到浓度异常时离开第2过渡期，注意到病征时离开第3过渡期。一些多发人体内自身免疫非典型的有机体，在1期和2期，实质性较慢，并演进为发作的1改进型白血病。我们之前描述了一四组在首次监测到多种人体内自身免疫抽样后仅仅10年无白血病的极慢实质性者，这四组病人数目少，但不同之处非常指明。随后，我们发现人体内自身抗原特异性CD8+T细胞核自由基在实质性极快的病人中的基本不存在，但在近期发作和长期存在的白血病病人中的很容易监测到。这可能得出得出结论，与实质性病人相比较来说，这些病人自身免疫自由基的抑制加强。

以前研究工作得出得出结论，尽管抑制性T细胞核(Treg)数量正常，但白血病病人存在一些基本功能弱点，其中的包括对IL-2的自由基战斗能力减低。此外，白血病病人中的的波动CD4+T细胞核可能对抑制颇具抵抗性，发挥为波动T细胞核的可抑制消退，自然地激发的Treg和体外激发的诱导Treg，以及抗原境况的CD4+T细胞核中的IL-2自由基消退。本研究工作的目地是描述了CD4+抑制性T细胞核(Treg)在海岸边极极快实质性者中的的不同之处，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的主干研究工作，在21岁以下发病的病人亲属中的健康检查1改进型白血病的有可能诱因。我们之前描述了长期极快实质性者的不同之处，他们保有多重人体内自身免疫非典型至少10年，但未注意到白血病的诊疗病征，慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续保有无白血病并想要缺少大量肠道抽样的极快实质性者归入T和B细胞核基本功能统计分析。在目前的研究工作中的，8名慢实质性者(SP四组)，中的位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的人体内自身免疫非典型。所有的组织者都始终保持1改进型白血病实质性的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身免疫对某些抗原的非典型自由基，然而，一名病人之前始终保持2期仅仅6年，但未注意到诊疗病征，一名病人被发病为白血病，该受试者72岁，在采集试验中抽样时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中的对该诱导顺利完成了单独风险评估。复合外周血单个连锁自由基细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核奥义和T细胞核可抑制试验风险评估诱导中的Treg的Hz、表改进型和基本功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、也就是说和回归)顺利完成无行政官员聚类统计分析，风险评估Treg表改进型。

结果：与心理健康诱导相比较来说，来自慢实质性体的清醒CD4+T细胞核的行政官员聚类揭示，介导的清醒CD4+ TregHz减低，与糖皮质激素诱导的TNFR无关亚基(GITR)暗示减低有关。一名HbA1c消退的病人与实质性极快者和归一化的对应四组相比较来说，Treg著者有所完全相同。基本功能统计分析得出得出结论，与心理健康诱导相比较来说，来自极快实质性体的Treg细胞核内的CD4+波动T细胞核可抑制值得注意损伤。发挥为对波动CD4+T细胞核CD25和CD134暗示的可抑制减低。

示意图1 深入的表改进型统计分析揭示，CD4+Treg亚改进型在慢实质性函数调用中的减低。由FlowSOM聚合的Treg室，聚集在来自所有诱导的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据上面物暗示鉴定出10个元簇:清醒T细胞核_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞核;HLA-DR + GITR +清醒T细胞核;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)适用9个完全相同Treg上面聚合的10个元簇的MST。每个节点象征性一个空降兵(100个空降兵)，非常多的元空降兵(10个元空降兵)在节点四组区域内上色。每个节点中的的饼示意图对此单个上面的暗示层次。(b)每个元聚类的热示意图，以揭示总体上面暗示。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)聚合示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比较稀土元素为每个metacluster箱该线示意图(稀土元素> 0.05%)断定为HD和SP四组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞核(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞核(l)。黄色橘色象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 适用CITRUS的预测模改进型证实，TregHz的减低是实质性极快的标志。分级奈斯(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP组织者和归一化的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的象征性性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR暗示顺利完成复合，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)四组以及诱导SP 606(黄色)中的CD25+ cd127的Hz概述示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯孙邻域的箱该线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑橘簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示高强度着色，箭头引人注意的簇被识别为SP和HD函数调用彼此间的完全相同。(j)箱该线示意图揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组中的，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相比较稀土元素(比率)。(k)直方示意图揭示每个簇的表改进型(黑色)和Treg上面相比较暗示与历史背景暗示(黄色);上列，文件系统Treg_3;下面一行，文件系统Treg_4。历史背景与所有其他簇中的上面的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验

示意图3 与心理健康献血者相比较来说，实质性极快者清醒treg的GITR减低。每个清醒CD4+T细胞核元簇(清醒T细胞核_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞核;HLA-DR + GITR +清醒T细胞核;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个暗示上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的暗示热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中的所有HD(粉红色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR暗示串联，揭示直方示意图(c)和概述示意图(d)。Wilcoxon配对字母秩和检验，p< 0.07(黄色)所有诱导包括，p< 0.05(黄色)诱导SP 606和归一化的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR暗示，从分级奈斯，从所有HD(粉红色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)串联，揭示直方示意图(e)和概述示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对字母秩检验

示意图4 来自极快实质性的CD4+ treg细胞核压制波动CD4+T细胞核的战斗能力减低。SP四组用黄色的该线和橘色对此，HD四组用黑色的该线和橘色对此，黄色的该线/橘色对此诱导sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利完成分选。CD4+CD25−(转发者)被上面为CFSE, Treg按仔细观察的比率指示剂。用抗CD3 /28微珠还原细胞核，培育出3紧接著顺利完成流式细胞核奥义监测。(a-d)与CD4+转发者相比较应的treg培育出(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培育出。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制比率。适用非典型对应(介导的叛离细胞核内含treg)计算可抑制比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 波动CD4+T细胞核对极快实质性的T细胞核还原的可抑制非常敏感。SP四组用黄色的该线和橘色对此，HD四组用黑色的该线和橘色对此，黄色的该线/橘色对此诱导sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利完成分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel上面，treg按仔细观察的比率指示剂。用抗CD3 /28微珠还原细胞核，培育出3紧接著顺利完成流式细胞核奥义(CD25反染)和细胞核因孙子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培育出。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制百分率(b)。(c,d) CD25可抑制百分率(c)和CD134可抑制百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中的的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得出结论：我们得出的得出结论是，来自极快实质性孙子的还原清醒CD4+Treg在GITR暗示中的得到了拓展和独特，合理化了必要性研究工作Treg在1改进型白血病风险有机体中的的举例来说的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28